公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S1 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63763 |
細(xì)胞名稱 家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S1
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞系來(lái)源于一雄性家貓的皮膚組織。2000年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。
培養(yǎng)條件: M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P3
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 熒光法(-)
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
H-ras檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠成纖維細(xì)胞;φ2形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣H-ras
IFN-γR1-CDw119檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Sp2/0-Ag14[SP20]形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣;圓形IFN-γR1-CDw119
KIT Ligand檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞;SW-13形態(tài)特性: 上皮樣;多角KIT Ligand
L1細(xì)胞粘附分子檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人結(jié)直腸癌細(xì)胞;T84形態(tài)特性: 上皮樣;多角L1 cell adhesion molecule
Laminin-5;Epiligrin檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞;U251形態(tài)特性: 多角Laminin-5;Epiligrin
Mac-2結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞;THP-1形態(tài)特性: 單核細(xì)胞 Mac-2BP
MEK激酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO形態(tài)特性: 上皮樣細(xì)胞MEK
MEST檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞;U937[U-937]形態(tài)特性: 單核細(xì)胞Mesoderm-specific transcript homolog protein
microRNA-210檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠垂體瘤細(xì)胞(分泌促生長(zhǎng)激素分泌激素);AtT-20形態(tài)特性: 小圓形細(xì)胞microRNA-210
Spondin-2;mindin檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞;BV2形態(tài)特性: 多形型Spondin-2
MRP-14檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Fox-NY形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Myeloid-related portein8;14
腎上腺髓質(zhì)前體中段肽檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人胃腺癌細(xì)胞;BGC-823形態(tài)特性: 上皮樣midregional fragment of pro-adrenomedullin
MxA蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1形態(tài)特性: 多角MxA Protein
NADH-細(xì)胞色素b5還原酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-HSF-1形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣NADHcytochrome b5 reductase
NOD樣受體1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人纖維肉瘤細(xì)胞;HT-1080形態(tài)特性: 上皮樣NOD-1
NOD樣受體-2檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人耐VP16絨癌細(xì)胞株;JEG-3/VP16形態(tài)特性: 上皮樣;多角NOD-2
OX40 Ligand檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3-VP16-TNFa形態(tài)特性: 上皮樣;多角OX40 Ligand
家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S1LB瓊脂(lennox)規(guī)格:250g用途:用于分子生物學(xué)中大腸桿菌的培養(yǎng)
桑塔斯瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格:詳情介紹
大腸桿菌成套生化鑒定管(DCSN)規(guī)格:4種*4套用途:用于大腸桿菌的IMVC生化鑒定組成:蛋白胨水(色氨肉湯)4支、MR-VP 8支、Korser氏枸櫞鹽肉湯4支。(需甲基紅試劑盒、V-P試劑盒、Kovace靛基質(zhì)試劑盒配套使用)
含酶的TSA表面接觸皿(55mm)規(guī)格:10個(gè)/包用途:用于環(huán)境、器皿、設(shè)備和表面的無(wú)菌檢測(cè)。
無(wú)菌均質(zhì)袋(32cm*20cm)(不帶壓條)規(guī)格:100個(gè)/包用途:用于樣品的均質(zhì)
克氏雙糖鐵瓊脂規(guī)格:250g用途:用于細(xì)菌復(fù)合生化試驗(yàn)(葡萄糖,乳糖)
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。