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產(chǎn)品展示   ProductsATCC細(xì)胞>>轉(zhuǎn)化細(xì)胞>>小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞;LWnt-3A
 
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產(chǎn)品名稱:
小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞;LWnt-3A
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小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞;LWnt-3A相關(guān)產(chǎn)品:
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  小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞;LWnt-3A的詳細(xì)資料:

公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:

產(chǎn)品名稱

生長特性

貨號(hào)

小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞;LWnt-3A

貼壁生長

EY-X63910

細(xì)胞名稱  小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞;LWnt-3A
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞

生長特性: 貼壁生長

特征特性: L-M(TK-)cells(ATCCCCL-1.3)用Wnt-3A表達(dá)載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株。Wnt-3A基因編碼一個(gè)有變異的信號(hào)功效分泌性糖蛋白。Wnt基因控制胚胎發(fā)過程中的許多模式形成和生長事件。這些細(xì)胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。它們是目前Wnt-3A條件培養(yǎng)基的好來源。由于這種條件培養(yǎng)基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子,對(duì)于涉及Wnt-3A條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)有必要用其來源細(xì)胞株(ATCCCRL-2648)作對(duì)照。

培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;0.4mg/mlG-418

傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況: PN5

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 陰性
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
唾液結(jié)合Ig樣凝集素7檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 人類結(jié)腸癌細(xì)胞系;DXH-1形態(tài)特性: 上皮樣Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 7

森林腦炎IGG抗體檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;11F11E4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣forest encephalitis IgG antibody

森林腦炎IGM抗體檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;A12D3形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣forest encephalitis IgM antibody

狂犬病 IGM檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠正常氣管上皮細(xì)胞;MNTEC/HL-007形態(tài)特性: 上皮樣Rabies virus IgM

愛潑斯坦-巴爾病 IGM檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;FF/7A8形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Epstein Barr virus IgM

二氫脫氫酶檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;TAP/5F4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣dehydrogenas

8-羥基(脫氧)檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;C12D1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣8-oxoguanine glycosydase

可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 人正常角膜上皮細(xì)胞;HNCEC/HL-008形態(tài)特性: 上皮樣Soluble Vascuoar endothelial cell growth factor receptor2

肌肉肌激酶檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 人正常眼瞼上皮細(xì)胞;HNEEC/HL-014形態(tài)特性: 上皮樣Creatine kinase M-type

可溶性血小板膜糖蛋白Ⅵ檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 人正常上皮細(xì)胞;HNVEC/HL-016形態(tài)特性: 上皮樣soluble platelet membrane glycoprotein Ⅵ

序列相似家族150成員A檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 人正常主氣管上皮細(xì)胞;HNTEC/HL-013形態(tài)特性: 上皮樣Family With Sequence Similarity 150, Member A

GFAP的降解產(chǎn)物檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 人正常眼瞼上皮細(xì)胞;HNEEC/HL-015形態(tài)特性: 上皮樣GFAP-BDP

Ⅰ型細(xì)胞質(zhì)膜蛋白檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠正常食管上皮細(xì)胞;MNEEC/HL-009形態(tài)特性: 上皮樣HTI56

腦膜炎奈瑟菌IgM抗體檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 大鼠正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞;RNSK/HL-010形態(tài)特性: 上皮樣neisseria meningitidis IgM antibody

唾液褪黑素檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 大鼠正常食管上皮細(xì)胞;RNEEC/HL-011形態(tài)特性: 上皮樣Melatonin direkt Saliva

尿褪黑素硫鹽檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 大鼠正常食管上皮細(xì)胞;RNEEC/HL-012形態(tài)特性: 上皮樣Urine melatonin sulfate

丁肝抗原檢測試劑盒細(xì)胞名稱: 乙型肝炎病全基因組轉(zhuǎn)基因人肝細(xì)胞系;HL02-H1形態(tài)特性: 上皮樣HDV-Ag
小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞;LWnt-3A銀杏內(nèi)酯J107438-79-9中文別名:白果苦內(nèi)酯J  

英文名:Ginkgolide J  

CAS登錄號(hào):107438-79-9

分子式:C20H24O10

分子量:424.39

分子結(jié)構(gòu):

外觀:結(jié)晶

規(guī)格:20mg/支

純度:≥ 98%

用途:用于含量測定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。

提取來源:銀杏科Ginkgo biloba Leaf P.E.

熔點(diǎn):322℃

旋光度:-11.8° (c=1,乙醇)

藥理藥效:存在于銀杏科植物銀杏(Ginkgo biloba L.)的外種皮中。本品有較強(qiáng)的殺菌或抑菌作用,對(duì)枯草桿菌、大腸桿菌、酵母菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌等均有作用。

貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光

有效期: 2年
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的  *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

 

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 LWnt-3A
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021-69985169
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