人原代B淋巴原代細胞

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：人

組織來源：外周血外周血

生長特性：懸浮生長

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

產(chǎn)品貨期：3-4周

運輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制：僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：:B淋巴細胞的祖細胞存在于胎肝的造血細胞島中，此后B淋巴細胞的產(chǎn)生和分化場所逐漸被骨髓所代替。成熟的B細胞主要定居于淋巴結(jié)皮質(zhì)淺層的淋巴小結(jié)和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結(jié)內(nèi)。B細胞在抗原刺激下可分化為漿細胞，漿細胞可合成和分泌抗體（免疫球蛋白），主要執(zhí)行機體的體液免疫。

B細胞在骨髓內(nèi)分化各階段的主要變化為免疫球蛋白基因的重排和膜表面標志的表達。B細胞在發(fā)育分化過程中，同樣也經(jīng)歷選擇作用，以除去非功能性基因重排B細胞和自身反應(yīng)性B細胞，形成周圍成熟的B細胞庫。B細胞表面有多種膜表面分子，識別抗原、與免疫細胞和免疫分子相互作用，也是分離和鑒別B細胞的重要依據(jù)。B細胞表面分子主要有白細胞分化抗原、MHC以及多種膜表面受體。

細胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結(jié)締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據(jù)具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數(shù)?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數(shù)。

五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計數(shù)后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

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