人原代主動脈瓣膜間質(zhì)原代細胞
細胞培養(yǎng)操作:
收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)
傳代密度細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù)可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
傳代方法:
1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
3.用吸管輕輕吹打混勻,按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4.待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。
商品屬性:
規(guī)格 | 5x105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 貨號 | EY-XY3218 |
種屬來源 | 人 | 組織來源 | 主動脈組織 |
生長特性 | 貼壁生長 | 形態(tài)特征 | 長梭形、不規(guī)則細胞 |
形態(tài):長梭形、不規(guī)則細胞
培養(yǎng)基:DMEM+10% FBS+1% PS
培養(yǎng)環(huán)境:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代特征:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
細胞基本屬性:
種屬來源:人
組織來源:主動脈組織主動脈組織
生長特性:貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:5x105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
換液頻率:每2-3天換液一次
消化液:0.25%胰蛋bai酶
產(chǎn)品貨期:現(xiàn)貨,1周左右
運輸方式:T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞(包郵)
供應(yīng)限制:僅限于科學(xué)研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
背景介紹::主動脈瓣施半月瓣,位于左心室和主動脈之間,抑制射入主動脈的血液回流入左心室。主動脈瓣鈣化可引起主動脈瓣狹窄關(guān)閉不全等,施導(dǎo)致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變,其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明,瓣膜間質(zhì)細胞向城固細胞樣細胞表型轉(zhuǎn)化有可能是主動脈瓣膜鈣化的病理改變基礎(chǔ)之一。
原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括:
?一、剝離組織,去除外膜、結(jié)締組織等?:將組織從動物體中取出,并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。
二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?:使用生理鹽水或其他適當?shù)木彌_液洗滌組織,然后將其剪成約1mm大小的小塊。
三、?用0.1%~0.2%的消化?:將剪碎的組織塊加入含有0.1%~0.2%的緩沖液中,進行消化。消化時間可根據(jù)具體實驗需求選擇熱消化(37℃)或冷消化(4℃),熱消化時間短,冷消化時間長但條件更溫和。
?四、吹打分散后,過濾、計數(shù)?:將消化后的細胞吹打到一個離心管中,然后過濾、計數(shù)。
五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?:將計數(shù)后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。
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