小鼠原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)原代細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)操作:
收貨處理取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)
傳代密度細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù)可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
傳代方法:
1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
3.用吸管輕輕吹打混勻,按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4.待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。
商品屬性:
規(guī)格 | 5x105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 貨號 | EY-XY3575 |
種屬來源 | C57BL/6 小鼠 | 組織來源 | 骨髓 |
生長特性 | 貼壁生長 | 形態(tài)特征 | 成纖維細(xì)胞樣 |
形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
培養(yǎng)基:小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基(IMP-M097)
培養(yǎng)環(huán)境:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代特征:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
細(xì)胞基本屬性:
種屬來源:C57BL/6 小鼠
組織來源:骨髓骨髓
生長特性:貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:5x105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
換液頻率:每2-3天換液一次
消化液:0.25%胰蛋bai酶
產(chǎn)品貨期:現(xiàn)貨,1周左右
運(yùn)輸方式:T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞(包郵)
供應(yīng)限制:僅限于科學(xué)研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
背景介紹::骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,對骨髓中的造血干細(xì)胞(HSC)不僅有機(jī)械支持作用,還能分泌多種生長因子(如IL-6,IL-11,LIF,M-CSF及SCF等)來支持造血。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)具有多向分化潛能,能促進(jìn)間充質(zhì)組織的再生,如:骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質(zhì)等組織。在骨髓中,BMSCs占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%~0.1%,含量極低。而同時,由于組織工程需要大量的種子細(xì)胞,從嚙齒類動物骨髓分離BMSCs的技術(shù)上的難度限制了許多實(shí)驗(yàn)的開展。體外分離培養(yǎng)純度高、活力強(qiáng)、生物特性均一的BMSCs對組織工程及細(xì)胞的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)顯得至關(guān)重要。
原代細(xì)胞培養(yǎng)的主要步驟包括:
?一、剝離組織,去除外膜、結(jié)締組織等?:將組織從動物體中取出,并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。
二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?:使用生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌組織,然后將其剪成約1mm大小的小塊。
三、?用0.1%~0.2%的消化?:將剪碎的組織塊加入含有0.1%~0.2%的緩沖液中,進(jìn)行消化。消化時間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求選擇熱消化(37℃)或冷消化(4℃),熱消化時間短,冷消化時間長但條件更溫和。
?四、吹打分散后,過濾、計(jì)數(shù)?:將消化后的細(xì)胞吹打到一個離心管中,然后過濾、計(jì)數(shù)。
五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?:將計(jì)數(shù)后的細(xì)胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。
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